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Dénombrement de levures
La nature microscopique de la levure peut être facilement illustrée par l'estimation du nombre de cellules dans un cube de levure boulangère acheté dans le commerce et par comparaison du nombre obtenu avec la population humaine sur terre. Pour y arriver nous allons diluer les cellules de levure dans de l'eau, afin de pouvoir déposer des nombres mesurables de cellules sur des boîtes de pétri. Après incubation à 30°C, chaque cellule viable donnera lieu à une colonie sur une boîte.
Thèmes: Diverses méthodes de mesure, travail en conditions stériles, petits organismes, grands nombres, formation de colonies sur boîtes de pétri.
L'EXPERIENCE:
- Prélevez d'un cube de levure boulangère un petit morceau d'environ 1 g et pesez-le sur une balance. Il n'est pas important qu'il fasse exactement 1 g, mais il faut en noter le poids exact. Resuspendez le petit morceau dans 10 ml d'eau stérile.
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Faites des dilutions en série dans de l'eau stérile (voir schéma).
A titre indicatif, une suspension de levure un peu trouble correspond à environ 107 cellules/ml, ou une absorption (OD600) de 0.5. Il est aussi possible de compter les cellules dans la chambre de thoma, ou plus facilement avec les cellules Kovas. Ces méthodes n'indiquent toutefois pas le nombre de cellules vivantes. Pour avoir le nombre de cellules vivantes, il faut les étaler sur une boîte de Petri. -
A l'aide d'un râteau, étalez 100 µl des deux dernières dilutions sur deux boîtes YPD et incubez les pendant deux jours à 30°C.
Attention
Marquez les boîtes sur le fond (et non sur le couvercle) avec votre nom, le numéro de l'expérience et le point que vous avez étalé. Mettez les boîtes à l'envers dans l'étuve à 30°C pour éviter que les gouttes de condensation ne tombent sur les colonies.
Par exemple
0.25 g de levure dans 10 ml d'eau stérile. On effectue des dilutions en série (-> 10-2 -> 10-4 -> 10-6) et on étale 0.1 ml sur une boite. Après 2 jours à 30°C on compte 30 colonies. Cela correspond à environ 5 x 1011 cellules vivantes par cube (30 colonies x 10 ml x 107 dilutions x 42 g (le poid d'un cube) x 4)
Un exemple de l'expérience avec images est visible ici.
Matériel fourni:
- Pipettes plastique 10 ml stériles
- Propipettes
- Micropipettes P200
- Micropipettes P1000
- Boîte de pointes bleues
- Boîte de pointes jaunes
- Rack de 48 tubes stériles pour dilutions
- Boîtes de Petri YPD
- Boîte pipettes Pasteur pour les étalements
- Portoirs pour tubes en verre
- Sac jaune pour les déchets
- Bouteille d'eau stérile
- Vortex
Matériel non fourni:
- Bec bunsen
- Cubes de levure
L’Université de Genève décline toutes responsabilités en cas de dommages survenus durant les expériences.
